茶粕中的茶皂素含量怎么检测

茶籽饼粕营养丰富，是潜力很大的饲料资源

但茶籽饼粕含有茶皂素，对动物机体有很大*害

作用本文针对茶皂素，对现有的主要检测检验方

法综述如下

1茶皂甙的分析方法

1.1重量法

朱全芬等（1983）从糖体，配基两方面着手测

定，对比出以其配基含量为基础的定量法较宜茶

皂甙能与铅钡盐等作用产生沉淀，形成复盐，沉

淀剂的选择以碱式醋酸铅为好，其测定值稳定，干

扰少，误差范围小，重演强复盐在酸条件下

又重新解离出金属离子和茶皂甙除去金属离子

后，茶皂甙在强酸条件下水解，糖体被水解，获得

不溶于水的茶皂苷元由茶皂苷元的含量可求得

茶皂甙的含量该法涉及到换算系数的问题，即

100g茶皂苷元相当于多少克茶皂甙理论上，一个

的茶皂甙水解可以得到一个的茶皂苷

元，但是茶皂甙是一类混合物，配基结构有多种，

因此，不同研究者对于茶皂甙量的测定值略

有出入；茶皂甙中有机酸类也能发生上述反应，其

结果的准确度亦受水解条件的制约；另外，该法虽

测定数值稳定重演强等优点，但分析时间长，

作繁复，难以满工业分析的需要

1.2比法

比法是利用三萜类皂苷的显反应，选择

一种线关系良好的显剂，反应后用分光光度

计测吸光度，用对照品皂甙的标准工作曲线定量

常用的显剂有间苯三酚-乙醇溶液苯酚-硫

酸香草醛-浓硫酸对-二甲氨基苯甲醛三氯

化铁-浓硫酸法等研究表明，比法消耗试剂

少，作简便，分析快，重现及准确度也较好，适

用于工业分析

1.2.1间苯三酚法（皂甙糖体定量分析法）

该法基于测定水解前后糖含量之差，间接定

量皂甙的含量戊糖与己糖在非含氧酸存在的酸

条件下可转化成糖醛，糖醛进一步可与间苯三

酚作用形成有物质，泽强度与糖分含量呈一

定相关样品中除了茶皂素以外，尚有寡糖和多

糖存在，选用溶剂法提取茶皂素以排除多糖的干

扰，再用碱式醋酸铅除去供试液中的茶皂素，测定

出其他糖分的含量，与供试液中总糖分测定值之

差，计算出茶皂素的含量

该法适用于实验室研究和工业分析中茶皂甙

含量的测定，作简便快速，消耗试少，重现

强此法不仅能用于茶籽中茶皂素的定量分析，

亦适用于已知糖分种类的糖体定量分析与重量

法相比，2种方法都比较稳定，但间苯三酚法测定

结果略高，且分析一个样品，间苯三酚法一般只需

1个工作日，重量法至少需要3个工作日

1.2.2苯酚-硫酸法

单糖或低聚糖在浓硫酸作用下迅速脱水生成

糠醛衍生物，与苯酚缩合成有物质，其呈与浓

度呈线关系，据此测定糖含量，从而间接测定皂

甙的含量岛田和子采用固相萃取柱的前处理方

式，将茶叶浸出液加入到Sep- Pak C18固体萃取

柱，先用蒸馏水洗去水溶的单宁，再用浓度20%

的甲醇洗去儿茶素，后用浓度80%的甲醇洗提

得到含皂甙的甲醇溶液，真空干燥下浓缩得到茶

皂素的粗品，测定了GyokuroMatchaSenchaHojicha和Bancha的浸出液中茶皂甙的含量，并指出

Gyokuro中的皂甙含量Mukai等也用该法对

茶籽中的皂甙进行了测定

1.2.3香草醛-硫酸法

香草醛-硫酸法反应机理可能是皂甙在强氧

化酸作用下脱氢，氧化后再与香草醛加成生成

有物质该方法具有作流程短，方法简便可行

等优点朱全芬等，傅春玲等指出以8%的香草醛

-乙醇溶液和77%硫酸为显剂，测定波长为

2.5nm，显反应温度为60，反应时间为

15min为宜，线范围为0- 20 g/ml

该法与间苯三酚法相比较，反应灵敏，显相

对稳定，反应条件容易控制，但试剂消耗量大，

作流程长，被测样品需要经过初步纯化间苯三酚

法测定结果稍高，可能是由于部分多糖类未被完

全除去造成的香草醛-浓H2SO4显法是常

用的皂苷定量方法,实验结果表明它具有反应灵

敏,作相对简测糖定量法具有显相对稳定,反

应条件容易控制,但试剂消耗量大,作流程长,被

测样品需经过初步纯化等缺点

1.2.4对-二甲氨基苯甲醛法

皂素与对二甲氨基苯甲醛在浓磷酸的乙醇溶

液显棕红，且在一定浓度范围内符合比尔定律，

确定的佳条件如下：显剂加量为1mL3%对二

甲氨基苯甲醛乙醇溶液和1.5mL的浓磷酸，显

反应温度70，反应时间15min，测定波长

525nm，本方法相对标准偏差（RSD%）为1.61%，平

均加标回收率X=99.44%五环三萜的齐墩果烷结

构的皂甙类都能与对-二甲氨基苯甲醛反应显

，且泽强度随皂甙浓度增加而增强利用这一

反应，用1%对-二甲氨基苯甲醛与茶皂甙浸提液

加热显，用H3PO4作稳定剂，在525nm进行测

定，用茶皂甙对照品作标准曲线，从而求出茶皂甙

的含量该法测量浓度范围为0- 100mg/ml谭新东

等用该法分别对茶树的不同部位进行测定，指出

样品颗粒的粉碎程度对试验结果有较大影响；未

脱油的茶籽粉中含有约30%的粗脂肪，对茶籽粉

中茶皂甙的提取造成了困难，使测量结果偏低

1.2.4三氯化铁-浓硫酸法

茶皂甙与三氯化铁（FeCl3）呈黄绿的显反

应，因此可用分光光度计测其吸光度，用对照品皂

苷的标准工作曲线定量姜勤等采用该法，用D

型大孔树脂除去小糖氨基酸无机盐等水溶

杂质及部分大素等杂质后，用分光光度

计测定其吸光度，对茶皂甙进行了定量分析刘晓

庚等认为植物样品中的酚类物质也能与FeCl3发

生类似的显反应，直接用单波长分光光度法测

定时干扰严重为此，其利用茶皂甙与FeCl3反应

之间的反应速率不同，进行速差分光光度法（或双

波长分光光度法等）测定，结果可以在二者不进行

分离的条件下直接测定样品中的茶皂甙含量，测

量浓度范围为0- 20mg/ml

1.3荧光光度法

荧光光度法是基于茶皂甙对铝- 8-羟基喹啉

的荧光有增敏作用，且在一定浓度范围内荧光相

对强度（F）随茶皂甙含量的变化而呈线变化进

行测量刘晓庚等考察了Na

+ K+

Cu

2+

Fe

3+

Fe

2+

NH

4+

Ma2+

Mg2+

Ca

2+

Zn

2+

Co

2+

M0(Ⅳ）Cr

3+等常

见阳离子和Cl

- SO4

2-Br

- CO3

2-等常见阴离子以

及蔗糖葡萄糖大豆蛋白胨等干扰剂的影响，在

干扰剂的浓度不超过试样中茶皂甙含量50倍时，

均不产生明显的干扰作用因此认为，在通常况

下用该方法对茶皂甙进行测定时，无需对样品进

行特殊或分离处理便可直接测定，该法的线范

围为0耀4.25mg/ml用荧光光度法和速差分光光

度法测定茶皂甙的结果与重量法的测定结果十分

吻合，而且2种方法都具有相对标准差（RSD）小

重现好灵敏度高测量浓度范围较宽回收率

也好等特点荧光光度法与速差分光光度法相比

较，荧光法的重现和灵敏度优于速差法，但荧光

法的回收率偏低，测量浓度范围稍小，更适合于微

量茶皂甙的测定

1.4薄层扫描法

茶皂甙中皂甙虽是一系列结构为相似的三

萜皂甙化合物，但在薄层谱（HPTLC）板上

通常只显示一个斑点，在280nm附近有大光吸

收，可以将对照品与之比较，利用薄层谱扫描仪

进行定量，即可测定茶皂甙中皂甙类成分的含量

该法重现好，回收率高，结果较准确，稳定好，

即使没有薄层扫描仪，可以用碘显，然后刮板分

离，待碘挥发后溶解在甲醇中，用紫外光谱测定

田世雄等用HPTLC（20cm 10cm），以正丁醇（用

水饱和）：甲醇：吡啶=18：1：1为展开剂，测定了茶

皂甙含量结果表明，薄层谱分离样品，可除去

干扰成分，在不经显的况下，直接进行紫外扫

描，大大降低了皂甙测定误差，其测定值在数十小

时内无明显变化

1.5溴酸钾法

溴对没有空间阻碍的碳-碳双键加成反应很

快，故可以作为滴定反应的滴定剂茶皂甙的五环

三萜的糖苷配基上的19有一具环己烯质的

双键，有些与其成酯的酸间也有个双键，且均不呈

空间阻碍，因而可以溴酸钾作为滴定剂，以甲基橙

为指示剂，以溶液由橙红变浅或消失作为滴定

终点来测定茶皂甙的含量由于茶皂甙有些含1

个双键有些含2个双键，因此茶皂甙与溴加成的

n值需要通过对纯品测试结果来确定；另外，由于

干扰溴加成反应的影响因素较多，所以宜在测定

之前对试样加以预处理，排除干扰物

1.6液相谱法

液相谱（HPLC）法具有高压高速高

效高灵敏度的特点，现已成为分离皂甙的常用方

法由于茶皂甙结构的相似和复杂，目前

HPLC主要应用于茶皂甙的分离和纯化方面钟世

安等（2007）研究了用索氏提取器提取茶籽饼中茶

皂素，选择合适的大吸收波长，排除了黄酮和单

宁酸的干扰，优化了谱条件，建立了反相液

相谱法测定茶皂素含量的方法：以RP- ODS

C18(150mm 4.6mm，5 m)作分析柱，以甲醇作茶

皂素溶液的溶剂和流动相，流速慢，控制在0.50

mLmin- 1，检测波长为280nm，以质量浓度为横坐

标，峰面积为纵坐标，得到工作曲线，其回归方程

为Y=3.54 106X+1.15 105，相关系数为0.9997

测得回收率在97.2 102.1之间，相对标准偏

差(n=7)小于0.35此法的试剂消耗量少，作简

便，回收率高，相对标准偏差较小，度和准确

度高刘新清采用该法对茶籽中的茶皂甙进行定

量分析，采用ODS- Hypersil柱，甲醇作流动相，在

215nm处进行检测刘新清检测茶皂素采用

Hewlett Packard ODSHypersil5微米谱柱，125

4毫米不锈钢柱，甲醇作流动相，0.5毫升/分流

速；检测波长215纳米，柱温为室温，茶皂素标准

品含量大于95%结果表明，该法简便快捷重现

好准确度高，适于茶皂甙含量的测定谭等

（2009）以VP- ODS（250mm 4.6mm，C18，5 m）

作分析柱，以甲醇-水（v v=9 1）作流动相，流

速控制在1.0ml min，检测波长280nm，以质量浓

度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到工作曲线为

Y=3.02 10

6X 1.16 10

4，线相关系数为0.999

5回收率为97.02% 102.82%该法具有相对标

准偏差较小，精密度和回收率高，作简便等优

点，是一种较好的分析方法采用该方法测得茶籽

饼中粗茶皂素的含量为11.89%赵静娟等（2009）

采用Angilen,TC- C18, 25 m,250mm 4.6mm做

谱柱检测波长为209nm，柱温: 25，用流动相

A:纯水；流动相B:乙腈进样5 L，运行25min梯

度:0~10min内流动相B由5%增至25%,保持

14min后1min内回至5%流速: 1mL/min并比较

了)比较了香草醛浓硫酸显定量法和HPLC定量

法,得出HPLC法可以对油茶皂苷进行更准确的定

量的结论

2小结

目前，茶皂甙以其优越的表面活以及生物

活得到了广泛的应用由于皂甙结构的相似

多样以及复杂，单体皂甙的分离工作一直是

茶皂甙研究中主要的困难之一尽管HPLC的

应用使得皂甙的研究工作发生了质的飞跃，现已

分离鉴定茶皂甙60种左右，但是在进入HPLC

系统前经多次的萃取，多次的硅胶柱，作繁琐且

一定程度上造成了重复差等问题，因此，对茶皂

甙单体的定量分析还有待于分离条件的进一步提

高另外，也还有许多的问题有待于进一步的研

究，如茶皂甙总量的测定方法各有优缺点，没有一

种标准的方法；茶皂甙标准品难寻，且现有的标准

品大多为混合物，不同品种的茶不同得到的

标准品有一定的差异等

试验研究

OK，本文到此结束，希望对大家有所帮助。